摘要： 熒光分光光度法是對熒光物質進行定性和定量的有效方法。目前國家標準對于測定海洋生物體重石油烴含量的方法有著明確的規定，即GB 17378.6-2007《海洋監測規范 第六部分：生物體分析》——13.石油烴 熒光分光光度法。此方法屬于仲裁方法。
本文依據國家GB 17378.6-2007內容，應用港東F-380型熒光分光光度計對海洋生物體中石油烴含量進行測定。結果證明此方法操作簡便， 線性良好是測定海洋生物體中石油烴含量的理想方法。
關鍵詞： 熒光分光光度法 海洋生物體 石油烴
原理
生物樣品經氫氧化鈉皂化， 用二氯甲烷萃取。將萃取液 中的二氯甲烷蒸發后， 殘留物用石油醚溶解， 于激發波長 310nm，發射波長360nm處進行熒光分光光度測定。
實驗條件
1、儀器及附件：
天津港東 F-380 型熒光分光光度計
熒光石英比色皿
2、分析條件：
激發波長：310nm
發射波長：360nm
3、藥品：
20#標準油（國家環境保護總局） 、活性炭（60目）、石 油醚（沸點范圍： 60～90℃） 、無水乙醇（重蒸餾）、氯化 鈉（飽和溶液） 、氫氧化鈉（優級純）、鹽酸、二氯甲烷 （重蒸餾）等。
4、其它：
分析天平（0.0001g） 、容量瓶、三角瓶、移液管、燒 杯、具塞比色管、擦鏡紙、玻璃層析柱、皂化瓶、錐形分液
漏斗、旋轉蒸發器等。
標準曲線及樣品測定
1、標準曲線制備
（1）標準曲線制備流程圖
（2）具體步驟
① 移 取：分別量取0mL、0.10mL、0.30mL、0.50mL、0.70mL、0.90mL油標準使用液（100μg/mL）于100mL皂化瓶 中；
② 皂 化：向上述皂化瓶中加入20mL氫氧化鈉溶液（6mol/L），室溫下避光皂化8～12小時，然后加入20 mL無水乙醇溶液（重蒸餾），充分搖勻；
③ 分 液：4小時后將皂化液轉入500mL分液漏斗中，用10mL二氯甲烷（重蒸餾）洗滌皂化瓶，洗滌液轉入分液漏斗中，加30mL氯化鈉溶液和100mL水，振蕩3min后靜置分層；
④ 旋轉蒸發：將有機相收集與旋轉蒸發瓶中，用10mL二氯甲烷溶液再萃取一次，合并有機相，于50℃水浴中將二氯甲 烷蒸發至0.5mL；
⑤ 收集待測：取下蒸發瓶用氮氣將殘留的有機溶劑吹干，準確加入10.0mL脫芳石油醚溶解殘留物。
2、標準曲線的建立
設置激發波長310nm， 發射波長360nm， 分別測試標準溶液待測液的熒光強度， 以相對熒光強度Ii-空白熒光強度I0為縱坐 標，石油烴含量（μg/mL）為橫坐標建立工作曲線。
3、樣品的制備及測定
（1）樣品制備流程圖
① 樣品前處理：烘干或冷凍干燥（對類脂物含量高的生物樣品）；
② 以相同的步驟同時制備分析空白樣品。
測定結果
應用F-380型熒光分光光度計的“光度測定”模塊建立石油烴的標準工作曲線，并進行樣品測定。
結論
采用熒光分光光度法測定海洋生物體中石油烴的含量，操作簡單，方法準確，是一種理想的方法。
由于石油烴標準溶液在測試過程中需要進行樣品的背景扣除， 因此實驗對儀器的功能要求更高。港東F-380型熒光分光光 度計率先在軟件上采用了獨特的雙背景扣除功能，自動計算石油烴的濃度，使整個實驗操作簡便，結果重現性良好。
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Printed in CHINA, September 1, 2011
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